第一版（14套） 浙江1、河北、河南、云南、湖南、湖北、四川、江西、安徽、黑吉辽蒙、陕晋青宁、广东、山东、贵州
选3综合题
一、选择
1.（广东）【胚胎工程与细胞工程】15. 研究人员发现，B7-H4蛋白在人滋养层细胞和某种乳腺癌细胞中高表达，且该蛋白与孕激素、细胞毒性T细胞的关系见图。已知细胞毒性T细胞可杀伤滋养层细胞和癌细胞。据图分析，下列叙述错误的是（）
A. 滋养层细胞将来会发育成胎膜和胎盘的一部分
B. 该种乳腺癌细胞通过表达B7-H4蛋白逃避免疫监视
C. 孕妇体内孕激素水平低下可能因免疫异常导致流产
D. 孕激素类似物可抑制该种乳腺癌患者体内癌细胞生长
二、非选择
1.（26安徽）20. 肿瘤化疗通过诱导肿瘤细胞的DNA损伤，引发肿瘤细胞死亡。肿瘤细胞会激活DNA损伤修复途径，导致肿瘤对化疗药物耐药。为探究P基因在乳腺癌中的作用机制，科研人员进行了相关研究。回答下列问题。
（1）培养细胞时，若恒温培养箱内CO2不足，会导致培养液______异常；乳腺癌细胞培养时______（填“会”或“不会”）出现接触抑制现象；细胞传代培养时需要用胰蛋白酶处理，使贴壁细胞分散成单个细胞，操作时需要控制处理时间，原因是______。
（2）P基因及转录方向、质粒图谱及目的基因插入位点的相关信息如图1所示（实线方框内横线处表示限制酶的识别序列，箭头处表示酶切位点）。为构建重组质粒，扩增P基因时，应选择的一对引物为______（填图2中序号）。为探究P基因对乳腺癌细胞增殖的影响，将重组质粒导入乳腺癌细胞的处理组作为实验组，对照组的处理是______。
（3）S基因主要通过抑制DNA损伤修复途径来抑制肿瘤增殖，引发肿瘤细胞死亡。研究发现，P蛋白能诱导S基因的启动子甲基化。这表明P基因______S基因的转录，______（填“促进”或“抑制”）肿瘤耐药。
2.（26湖南）21.（12分）阿尔茨海默病患者大脑中β-淀粉样蛋白（Aβ）异常聚集，损伤神经元。为了探索治疗该疾病的新方法，研究人员合成了一种嵌合抗原受体（CAR）基因，使其在星形胶质细胞中特异性表达，形成CAR-A细胞，并鉴定了这种细胞特异性识别、吞噬和降解Aβ聚集体的能力。回答下列问题:
（1）CAR 基因和病毒载体的部分结构（含限制酶切割位点）分别如图 a、b 所示。
①胞外识别区应选用 Aβ 聚集体的________（填“抗原”或“抗体”）特定片段编码序列。
②采用特异性启动子的目的是________。同时，为使该 CAR 基因正确插入病毒载体，并能通过绿色荧光蛋白（GFP）示踪其成功导入星形胶质细胞，应选用的两种限制酶是________。
（2）为鉴定 CAR-A 细胞能吞噬和降解 Aβ 聚集体，可用含 Aβ 聚集体的培养基培养 CAR-A 细胞，一段时间后更换不含 Aβ 聚集体的培养基继续培养，________（单选）的 Aβ 聚集体含量。
A. 24 h 检测细胞内B. 24 h 检测细胞外
C. 0 h 和 24 h 检测细胞内D. 0 h 和 24 h 检测细胞外
（3）给6月龄阿尔茨海默病模型小鼠注射携带CAR基因的病毒，3个月后，大脑Aβ聚集体减少，且神经元损伤标志蛋白的相对表达量下降。该实验对照组应注射________；该实验结论是________。
3.（26浙江1）24. 农杆菌能侵染真菌，介导真菌细胞的转基因。3-磷酸甘油脱氢酶是假丝酵母中甘油合成代谢途径的关键酶，将3-磷酸甘油脱氢酶基因（Gpd）构建到表达载体上，如图1所示。通过农杆菌介导法，转化假丝酵母野生型菌株，获得转Gpd的重组菌株。野生型菌株与某重组菌株分别进行发酵实验，生产甘油的结果如图2所示。
注：ZeoR是腐草霉素抗性基因，KanR是卡那霉素抗性基因
回答下列问题：
（1）表达载体导入农杆菌细胞：用
溶液处理农杆菌，制备________，再用电击法将表达载体导入农杆菌细胞，经筛选获得阳性克隆。为验证阳性克隆是否为转化成功的农杆菌，从繁殖后的菌株细胞中提取质粒，经________限制酶酶切后电泳，若出现4条DNA条带，则表明转化成功。
（2）假丝酵母重组菌株的获得：在________中的酒精灯火焰旁，取野生型假丝酵母菌种，采用________方法接种在固体培养基上培养，适时挑选________再接种到液体培养基进行培养。取适量的假丝酵母与农杆菌进行共培养一段时间后，杀灭农杆菌，然后在含有________的选择培养基中筛选，最终获得重组菌株。
（3）重组菌株生产甘油能力的分析：根据图2可知，与野生型菌株相比，该重组菌株用于发酵生产甘油的2个优点是________。若某生长正常的重组菌株发酵液中甘油的含量显著低于野生型菌株，从引起变异的因素分析，可能的原因有：在培养过程中重组菌株发生了突变，或________，导致甘油合成代谢受阻。
选3综合题·参考答案
一、选择
1.D
二、非选择
1.（1）pH 不会胰蛋白酶处理时间过长会过度分解细胞表面蛋白质，损伤细胞
（2）①或③和④将不含P基因的空质粒导入乳腺癌细胞
（3） 抑制 促进
2.(1) ①抗体 ②使 CAR 基因编码序列在星形胶质细胞中特异性表达；Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ
(2) C
(3) 没有携带 CAR 基因的病毒；携带 CAR 基因的病毒能减少阿尔茨海默病模型小鼠大脑 的 Aβ 聚集体，减轻神经元损伤
3.（1）感受态细胞；EcoRI和HindIII（2分，漏答不得分）
（2）超净工作台；平板划线法（或稀释涂布平板法）；单菌落；腐草霉素
（3）甘油产量高、发酵周期短（2分）；基因突变；T-DNA插入导致甘油合成相关基因被破坏（2分）
