【高考真题研究04】【细胞片层】不用胰蛋白酶,如何“无损”剥离?

背景与过程概述

（2025·广东）将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及用胰蛋白酶消化支架后分离片层（√）

题干描述的过程：

① 人眼睑成纤维细胞传代培养 → 形成支架（即成纤维细胞分泌的细胞外基质构成的支架）。

② 在支架上接种人口腔黏膜上皮细胞 → 上皮细胞在支架上生长、增殖，形成上皮细胞片层。

③ 分离获得上皮细胞片层用于研究。

关键点：分离的是上皮细胞片层，而不是分散的单个细胞。 在组织工程中，获得完整的细胞片层通常采用温度敏感培养皿或机械剥离等方法，避免使用胰蛋白酶。因为胰蛋白酶会消化细胞间连接蛋白（如E-钙黏蛋白）以及细胞与基质之间的黏附蛋白（如整合素），导致上皮片层破碎成单个细胞，无法获得完整的片层结构。

此外，支架本身由成纤维细胞及其分泌的基质构成，若用胰蛋白酶消化，会破坏支架甚至消化掉成纤维细胞，但题目要求分离的是上皮细胞片层，故不涉及用胰蛋白酶消化支架来分离片层。因此，该说法正确。

因此，题干所述“不涉及用胰蛋白酶消化支架后分离片层”是正确的。