(2021.湖北卷）为了减少反应中非特异条带（引物和模板不完全配对）的产生，可提高复性的温度（√）
在聚合酶链式反应（PCR）中，复性（退火）步骤是引物与单链模板通过碱基互补配对结合的过程。若退火温度过低，引物与模板之间即使存在错配（不完全配对）也能结合，导致非特异性扩增，产生非特异条带。提高退火温度可增加引物与模板结合的特异性，因为完全配对的引物-模板双链比错配的双链更稳定，能够耐受更高的温度而不解链。因此，适当提高退火温度能减少非特异条带的产生。该说法正确。
变性（90–95℃）：DNA双链解旋成单链。
复性/退火（45–65℃）：引物与模板单链的互补序列结合。
延伸（72℃左右）：Taq DNA聚合酶催化合成新链。
退火温度过低：引物与模板易发生错配 → 非特异性扩增增多。
退火温度过高：引物结合效率下降 → 扩增产量降低甚至无产物。
最佳退火温度通常比引物的理论熔解温度（Tm）低5℃左右，需通过梯度PCR优化。
引物设计不当（3′端稳定性差、自身互补或二聚体）。
退火温度过低。
Mg²⁺浓度过高。
循环数过多。
模板不纯或存在污染。
提高退火温度（首选）。
使用热启动Taq酶。
适当减少引物浓度。
降低Mg²⁺浓度。
减少循环数。
重新设计更特异的引物。
混淆“复性温度”与“变性温度”“延伸温度”的作用。
认为提高温度会减少所有条带（包括目的条带），但实际上目的是在保证目的条带前提下减少非特异带。
忽略引物Tm值差异对温度设置的限制。
因此，该说法正确。
文章来源：
四季读书网
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