山东高考每日一练（25•3）
（2026•25•3）小鼠基因W编码的蛋白质可调节脂肪代谢。研究人员将基因W转入酵母菌并使其稳定表达，实现了该蛋白的高效合成。该过程中用到末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），该酶不需要模板，可在DNA的3´端随机添加4种脱氧核苷酸，若只提供1种脱氧核苷酸，则连续添加多个该种脱氧核苷酸，称为同聚物加尾。相关信息所示。
(3)基因W和载体两者的同聚物尾配对后形成的重组载体存在部分单链区，为构建完整重组载体需要的2种酶是_______________________________，该过程中___________（填“需要”或“不需要”）添加引物，原因是 。
相关知识点：
一、与DNA有关的酶
酶 | 作用 | 作用相关“键” |
限制酶 | 切割DNA片段，产生两个（具有相同黏性末端或平末端） | 破坏 |
DNA连接酶 | 形成 | |
解旋酶 | 将双链DNA分子局部解旋为单链（ATP水解供能） | 破坏（氢键非化学键） |
DNA聚合酶 | 形成 | |
DNA（水解）酶 | 将DNA水解为 | 破坏 |
逆转录酶 | 形成 |
二、引物
1、定义：一小段能与DNA母链的一段碱基序列的短单链。
2、作用：引物需要互补结合在模板链的端,为提供结合位点,使子链得以从端向端延伸。
3、种类：为了保证基因的两条反向平行的链都可以作模板,需要种引物。
4、设计原则：
（1）引物长度通常为20~30个核苷酸，可防止随机结合。
（2）两个引物之间不能有连续4个碱基的互补配对,否则加入的引物自身形成双链。
（3）某一引物自身不能有大于4个碱基的互补序列的存在，防止自身折叠。
（4）为构建合适酶切位点，常常需要在2种引物的端添加不同的限制酶的识别列。
（5）设计的引物在使用前，需进行检测,以确保引物中的序列只在所扩增的基因中出现，而与其他基因不具有互补性。
（6）引物中CG含量要适宜，CG含量越高，复性温度越，产物特异性越。
三、本题解析
Pst I酶切后产生的黏性末端为3´端突出，若要重新从重组载体上切下，切割载体后要加同聚物G尾。
XhoI酶切后产生的黏性末端为5´端突出，先用DNA聚合酶补平，若要重新从重组载体上切下，切割后要加同聚物G尾。结果为：
【以上内容若有疑问，见《山东高考每日一练（25•3）》】
W基因和载体形成重组载体时，限制酶酶切部分重组后存在部分单链区，需 (补全单链区)，再由 (连接缺口)。
同聚物尾配对后存在可直接延伸的端，DNA聚合酶可直接从该末端延伸合成互补链，（填“需要”或“不需要”）引物起始。
山东高考每日一练（25•3）
（2026•25•3）小鼠基因W编码的蛋白质可调节脂肪代谢。研究人员将基因W转入酵母菌并使其稳定表达，实现了该蛋白的高效合成。该过程中用到末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），该酶不需要模板，可在DNA的3´端随机添加4种脱氧核苷酸，若只提供1种脱氧核苷酸，则连续添加多个该种脱氧核苷酸，称为同聚物加尾。相关信息所示。
(3)基因W和载体两者的同聚物尾配对后形成的重组载体存在部分单链区，为构建完整重组载体需要的2种酶是DNA聚合酶、DNA连接酶，该过程中不需要（填“需要”或“不需要”）添加引物，原因是DNA聚合酶能从缺口的3′端开始添加脱氧核苷酸（或：配对后的同聚物尾可发挥引物的功能）。
相关知识点：
一、与DNA有关的酶
酶 | 作用 | 作用相关“键” |
限制酶 | 切割DNA片段，产生两个（具有相同黏性末端或平末端）DNA片段 | 破坏磷酸二酯键 |
DNA连接酶 | 催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而连接起来 | 形成磷酸二酯键 |
解旋酶 | 将双链DNA分子局部解旋为单链（ATP水解供能） | 破坏氢键（氢键非化学键） |
DNA聚合酶 | 把游离的脱氧核苷酸连接到引物或者已有的DNA单链的3′端上 | 形成磷酸二酯键 |
DNA（水解）酶 | 将DNA水解为脱氧核苷酸 | 破坏磷酸二酯键 |
逆转录酶 | 以RNA为模板合成cDNA | 形成磷酸二酯键 |
二、引物
1、定义：一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。
2、作用：引物需要互补结合在模板链的3’端,为DNA聚合酶提供结合位点,使子链得以从5’端向3’端延伸。
3、种类：为了保证基因的两条反向平行的链都可以作模板,需要2种引物。
4、设计原则：
（1）引物长度通常为20~30个核苷酸，可防止随机结合。
（2）两个引物之间不能有连续4个碱基的互补配对,否则加入的引物自身形成双链。
（3）某一引物自身不能有大于4个碱基的互补序列的存在，防止自身折叠。
（4）为构建合适酶切位点，常常需要在2种引物的5'端添加不同的限制酶的识别列。
（5）设计的引物在使用前，需进行检测,以确保引物中的序列只在所扩增的基因中出现，而与其他基因不具有互补性。
（6）引物中CG含量要适宜，CG含量越高，复性温度越高，产物特异性越高。
三、本题解析
Pst I酶切后产生的黏性末端为3´端突出，若要重新从重组载体上切下，切割载体后要加同聚物G尾。
XhoI酶切后产生的黏性末端为5´端突出，先用DNA聚合酶补平，若要重新从重组载体上切下，切割后要加同聚物G尾。
结果为：
W基因和载体形成重组载体时，限制酶Pst I酶切部分重组后存在部分单链区，需 DNA聚合酶(补全单链区)，再由 DNA连接酶(连接缺口)。
同聚物尾配对后存在可直接延伸的3'端，DNA聚合酶可直接从该末端延伸合成互补链，不需要引物起始。
